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凝膠遷移或電泳遷移率實驗可以:
(1)研究DNA結(jié)合蛋白和其相關(guān)的結(jié)合序列相互作用;
(2)可用于DNA定性和定量分析;
(3)用于研究RNA結(jié)合蛋白和特定的序列的相互作用。
凝膠遷移或電泳遷移率實驗
凝膠遷移或電泳遷移率實驗結(jié)合蛋白和其相關(guān)的結(jié)合序列相互作用的技術(shù),可用于定性和定量分析。這一技術(shù)zui初用于研究結(jié)合蛋白,目前已用于研究結(jié)合蛋白和特定的序列的相互作用。
通常將純化的蛋白和細胞粗提液和同位素標記的探針一同保溫,在非變性的聚丙烯凝膠電泳上,分離復合物和非結(jié)合的探針復合物比非結(jié)合的探針移動得慢。同位素標記的探針依研究的結(jié)合蛋白的不同,可是雙鏈或者是單鏈。當檢測如轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子一類的結(jié)合蛋白,可用純化蛋白,部分純化蛋白,或核細胞抽提液。在檢測RNA結(jié)合蛋白時,依據(jù)目的結(jié)合蛋白的位置,可用純化或部分純化的蛋白,也可用核或胞質(zhì)細胞抽提液。競爭實驗中采用含蛋白結(jié)合序和寡核苷酸片段(特異), 和其它非相關(guān)的片段(非特異),合蛋白的特異性。在競爭的特異和非特異片段的存在下,依據(jù)復合物的特點和強度來確定特異結(jié)合。
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