蛋白層析柱工作中，要進(jìn)行幾個步驟呢

來源：蘇州匯通色譜分離純化有限公司 2022年06月12日 08:55

　　蛋白質(zhì)是生命活動的物質(zhì)基礎(chǔ)，也是生物體內(nèi)的功能性大分子。隨著分子生物學(xué)、結(jié)構(gòu)生物學(xué)、生物制藥行業(yè)等研究的不斷深入，蛋白質(zhì)純化成為近年來越來越熱的研究話題。

　　蛋白的純化大致分為粗分離階段和精細(xì)純化階段兩個階段。粗分離階段主要將目的蛋白和其他細(xì)胞成分如RNA、DNA等分開，常用的方法為硫酸銨沉淀法。精細(xì)純化階段的目的是把目的蛋白與其他大小及理化性質(zhì)接近的蛋白區(qū)分開來，常用的方法有：凝膠過濾層析、離子交換層析、疏水層析、親和層析等。

　　蛋白層析柱的特點(diǎn)：

　　1：耐壓高，透明

　　2：快速鎖定的適配器確保均一的流速和小的死體積

　　3：特定的裝柱器保證好的柱效

　　4：材質(zhì)有很好的化學(xué)耐受性

　　5：熱穩(wěn)定的夾套可維持一定的操作溫度

　　蛋白層析柱的工作流程：

　　1.預(yù)處理：在吸附樹脂的生產(chǎn)過程中，一般采用的是工業(yè)級原料，產(chǎn)品沒有經(jīng)過進(jìn)一步純化處理，樹脂內(nèi)部殘留少量單體，所以在使用之前，需用水溶性溶劑對其浸泡處理，然后用去離子水通過樹脂層，置換出水溶性溶劑離子方可投入使用。

　　2.逆流洗柱：用水洗出去水離子及破碎填料，樹脂裝入后，用蒸餾水反洗樹脂層，直至出水清晰、無氣味、無細(xì)碎樹脂為止。再依次用酸堿等浸泡、沖洗樹脂層，至出水呈中性為止。

　　3.水洗：水洗的主要目的是除去層析柱上所附著的渣滓。

　　4.吸附：吸附操作自上而下(或自下而上)通液，可采用不同流速，以選取條件。流出液每隔一段時間取樣檢測，達(dá)泄漏點(diǎn)停止吸附，或多柱串聯(lián)達(dá)飽和后解吸。吸附主要是吸取料液中的渣滓或要回收物，該過程應(yīng)控制料液的速度及吸附量，大孔樹脂應(yīng)*浸泡在料液里，以提高吸附效果和運(yùn)行穩(wěn)定性。

　　5.解吸、再生：解吸操作自上而下(或自下而上)通解吸劑，單柱吸附時，解吸與吸附操作對流為佳。解吸劑沸點(diǎn)要低以便回收處理。

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