【儀表網(wǎng) 儀表標(biāo)準(zhǔn)】陜西省食品科學(xué)技術(shù)學(xué)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《植物油 生育酚及生育三烯酚含量測(cè)定 反相高效液相色譜法》已形成征求意見(jiàn)稿。為保證標(biāo)準(zhǔn)的科學(xué)性、嚴(yán)謹(jǐn)性和適用性，現(xiàn)向社會(huì)各界公開(kāi)征求意見(jiàn)。
 

　　本文件按照GB/T 1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。參考GB/T 5524 動(dòng)植物油脂 扦樣；GB/T 26635 動(dòng)植物油脂 生育酚及生育三烯酚含量測(cè)定 高效液相色譜法等規(guī)程內(nèi)容。
 

　　本文件規(guī)定了用高效液相色譜儀同時(shí)測(cè)定植物油中 α-、β-、γ-、δ-生育酚及 α-、β-、γ-、δ-生育三烯酚含量的方法。本文件方法的檢出限為1mg/kg(樣品稱(chēng)樣量為 0.5g，定容25mL)。
 

　　方法原理：
 

　　植物油樣用正己烷溶解，用甲醇水溶液均質(zhì)提取后，通過(guò)高效液相色譜儀將各單體生育酚和生育三烯酚分離，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜保留時(shí)間對(duì)目標(biāo)物質(zhì)定性，采用外標(biāo)法定量。
 

　　儀器：
 

　　除常用實(shí)驗(yàn)儀器外，還包括以下儀器：
 

　　1.高效液相色譜系統(tǒng)。高壓泵；進(jìn)樣器；柱溫箱：柱溫可調(diào)節(jié)在 30 ℃(可選擇)；
 

　　熒光檢測(cè)器：具有295nm 激發(fā)波長(zhǎng)和330nm 的發(fā)射波長(zhǎng)；數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。
 

　　推薦使用熒光檢測(cè)器，若無(wú)熒光檢測(cè)器，也可以使用紫外檢測(cè)器。如果使用紫外檢測(cè)器，波長(zhǎng)應(yīng)設(shè)置為292nm。
 

　　2.高效液相色譜分析柱：可選用 250 mm×4.6 mm，填充平均粒徑約為 4 μm 的 Poroshell 120 PFP 柱。注：柱的長(zhǎng)度與直徑可根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件做相應(yīng)選擇。
 

　　3.IKA 均質(zhì)機(jī)。
 

　　4.高速冷凍離心機(jī)。
 

　　5.紫外分光光度計(jì)：能在精確波長(zhǎng)處準(zhǔn)確測(cè)定。帶10mm比色皿。
 

　　6.量簡(jiǎn)：100mL。
 

　　7.移液管：5mL，10mL 和20mL。
 

　　8.容量瓶：50mL和25mL。
 

　　9.氮吹儀。
 

　　標(biāo)準(zhǔn)溶液制備：
 

　　用正己烷溶解標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，配制生育酚及生育三烯酚標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液質(zhì)量濃度為1.00 mg/mL，轉(zhuǎn)移至棕色標(biāo)液瓶中，標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液置于-18 °C冰箱中避光保存，最多放置一周。用移液管吸取5mL儲(chǔ)備液至樣品試管中，在溫度不超過(guò)40℃真空條件下，用氮吹儀除去正己烷。用移液管向試管中注入10mL甲醇(5.2)振蕩溶解殘余物。用帶10mm比色皿的紫外分光光度計(jì)(6.5)，在270nm～310nm之間選擇適當(dāng)?shù)牟ㄩL(zhǎng)測(cè)吸光度。測(cè)得的吸光度應(yīng)在0.2~0.8之間。用吸光度除以表1中相應(yīng)的校正系數(shù)計(jì)算濃度(用mg/mL表示)。
 

　　分別移取1mL上述標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于容量瓶中，定容至10mL，得到混合標(biāo)準(zhǔn)中間液。用90%甲醇稀釋成0.05, 1, 2, 4, 6, 8, 10 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，現(xiàn)配現(xiàn)用。標(biāo)準(zhǔn)工作液在0 ℃~4 ℃之間避光儲(chǔ)存。
 

　　試劑瓶外用鋁箔包裹。
 

　　樣品制備：
 

　　稱(chēng)取油樣0.5g(精確到0.01)于50mL 離心管中，加入0.1g BHT 和1g 抗壞血酸，5mL 正己烷渦旋振蕩溶解，加入6mL 90%甲醇，9200(9000) r/min 均質(zhì) 90 s，4 °C 下離心 5 min，收集水醇層于25mL 容量瓶中，重復(fù)3次，最后定容到25mL，過(guò)0.22μm 濾膜，待測(cè)。
 

　　試樣測(cè)定：
 

　　依次將空白溶液和試樣溶液注入高效液相色譜儀中，得到色譜圖，以色譜保留時(shí)間進(jìn)行定性。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到試樣溶液中不同形式維生素E的濃度，平行測(cè)定次數(shù)不少于兩次。不同形式維生素E色譜圖參見(jiàn)附錄 A。
 

　　重復(fù)性：
 

　　在重復(fù)性條件下，獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%，以大于這兩個(gè)測(cè)定值的算術(shù)平均值的10%的情況不超過(guò)5%為前提。
 

　　再現(xiàn)性：
 

　　在再現(xiàn)性條件下，獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)值不得超過(guò)算術(shù)平均值的15%，以大于這兩個(gè)測(cè)定值的算術(shù)平均值的15%的情況不超過(guò)5%為前提。
 

　　更多詳情請(qǐng)見(jiàn)附件。